+7 (495) 133-07-07

 
Генетические исследования » HLA-типирование

HLA-генотипированиеAbbott HLA

 

HLA - human leucocyte antigens - антигены тканевой совместимости.

На поверхности практически всех клеток организма представлены молекулы (белки), которые носят название антигенов главного комплекса гистосовместимости (HLA - антигены). Название HLA - антигены было дано в связи с тем, что эти молекулы наиболее полно представлены именно на поверхности лейкоцитов (клетки крови). Каждый человек обладает индивидуальным набором HLA - антигенов.

Молекулы HLA выполняют роль своеобразных "антенн" на поверхности клеток, позволяющих организму распознавать собственные и чужие клетки (бактерии, вирусы, раковые клетки и т.д.) и при необходимости запускать иммунный ответ, обеспечивающий выработку специфических антител и удаление чужеродного агента из организма.

Синтез белков HLA - системы определяется генами главного комплекса гистосовместимости, которые расположены на коротком плече 6-й хромосомы. Выделяют два основных класса генов главного комплекса гистосовместимости:

I класс включает гены локусов А, В, С;

II класс - D-область (сублокусы DR, DP, DQ).

Области применения HLA-диагностики:

  • Трансплантация солидных органов (низкоразрешающее генотипирование)
  • Трансплантация костного мозга (высокоразрешающее генотипирование)
  • Диагностика HLA-ассоциированных заболеваний
  • ЭКО диагностика совместимости родителей
  • Фармакогенетика, выбор оптимальной химиотерапии
  • Мониторинг предсуществующих HLA-антител

 

Методы молекулярного HLA-генотипирования:

 

 

Все методы HLA-генотипирования предполагают наличие 3х этапов:

  1. выделение ДНК
  2. амплификация
  3. детекция результатов амплификации

 

Технология SSР (Sequence Specific Primers) базируется на ПЦР с использованием аллель-специфических праймеров, "улавливающих" искомые HLA участки ДНК с последующей детекцией методом гель-электрофореза.

Достоинства SSP технологии:

  • осуществляет типирование как на низком, так и на высоком разрешении;
  • определяет точечный аллельный полиморфизм, практически сравнимый с секвенированием;
  • оборудование для электрофореза сравнительно дешево и доступно.

Основной недостаток – низкая производительность. В 96-луночный термоциклер при низкоразрешающем типировании можно поместить только один образец (DR-локус – 24 пробирки, А-локус – 24 пробирки, В-локус – 48 пробирок). Время, затраченное таким образом на типирование одного образца, например, по А, В, DR от выделения ДНК до интерпретации результатов составит примерно 3 часа. За день, при хорошей организации, можно протипировать 2-3 человека.

 

SSP технологию можно рекомендовать

    -         HLA-лабораториям, использующим как низко- так и высокоразрешающее типирование, и со средней нагрузкой до 5-7 человек в неделю:

-         трансплантологическим отделениям,

-         клиникам пересадки костного мозга,

-         клиникам и институтам, выявляющим генетические заболевания.


 Технология SSO включает этапы ПЦР с последующей детекцией путем гибридизации ампликонов с олигонуклеотидными зондами.

 

Достоинства SSO технологии:

  • способность к полной автоматизации;
  • чувствительность системы позволяет выявить точечные мутации генов HLA;
  • специальная технология зондов (возможно определение полиморфизма двух или более сцепленных генов на одной цепи ДНК; снижение числа повторных типирований за счет отсутствия неоднозначных результатов, получающихся при обычном типировании);
  • постгибридизационная стабильность (одновременная обработка результатов по нескольким пробам);
  • амплификация для типирования каждого локуса в одной пробирке (определение локусов A, B, C, DRB1, DRB3, 4, 5, или DQB1 в одной пробирке);
  • высокая производительность;
  • минимизация погрешностей генотипирования за счет одного процесса амплификации;
  • время детектирования каждого образца менее 1 минуты;
  • время исследования занимает приблизительно 2 часа.

 

SSO технология рекомендуется:

- крио-хранилищам пуповинной крови;

- регистрам доноров костного мозга;

- крупным трансплантологическим центрам;

- онкологическим центрам.

 

Технология SBT

Секвенирование по Сэнгеру является последним этапом молекулярного анализа предварительно выделенного, амплифицированного и протестированного более простыми методами фрагмента ДНК. Секвенирование представляет собой определение нуклеотидной последовательности фрагмента ДНК путем получения серии комплементарных молекул ДНК, различающихся по длине на одно основание.

Для осуществления SBT технологии HLA-типирования лаборатория должна располагать дополнительно секвенатором.

 

Достоинства SBT технологии:

  • «Золотой стандарт» HLA типирования;
  • Полная информация о сиквенсах;
  • Секвенирование высокого разрешения (до 4-го знака);
  • Возможность детекции новых аллелей;
  • Возможность адаптации к большим лабораторным потокам.

 

 

ЛАБТРОНИКА - oфициальный дистрибьютор

ведущих мировых производителей медицинского оборудования:

Grifols Logo


TF logo

 

One Lambda Logo

 

BIO-RAD

 Sysmex

 Terumo BCT
 Erba lachema rus
   
   
Лабтроника Адрес: 119048, г. Москва, ул, Усачева, д.2, стр.1
Тел.: +7 (495) 133-07-07
E-mail: mail@labtronica.ru
создание сайтов
IT-ГРУППА “Передовик точка ру”
Яндекс.Метрика Google+